МКС 67.100.10

Изменение № 1 ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммунофермонтные методы определения наличия антибиотиков

Принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 104-П от 12.12.2017)

Зарегистрировано Бюро по стандартам МГС № 13965

За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AM. KG, RU, UZ, BY [коды альфа-2 no MK (ИСО 3166) 004]

Дату введения в дойствио настоящего измонония устанавливают указанные национальные органы по стандартизации*

Титульный лист и первая страница. Наименование стандарта. Заменить слово: «Иммунофер-монтныо» на «Иммунологические».

Раздел 1. Первый абзац. Заменить слова, «коровье молоко (далее — молоко)» на «молоко и сыворотку, в т. ч. сухую, (далее — продукт)»:

четвертый абзац после слов «одновременного определения» дополнить словом: «наличия». Раздел 2. Дополнить ссылками:

«ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 19881-74 Анализаторы потенциометрические для контроля pH молока и молочных продуктов. Общие технические условия

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 33957-2016 Сыворотка молочная и напитки на ее основе. Правила приемки, отбор проб и методы контроля»;

ссылку на ГОСТ 12.1.019-79 дополнить знаком сноски — *: дополнить сноской:

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009»;

ссылка на ГОСТ 28498-90. Наименование. Заменить слово: «определений» на «испытаний».

Пункт 3.2 после значения «66 °С» дополнить словами: «с отклонением от заданной температуры ± 1 °С».

Пункт 3.10. Шестое перечисление после значения «0.2 см³» дополнить словами: «или 0.3 см³»:

седьмое перечисление. Заменить слова: «в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору Np 3» на «, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги; пипетками вместимостью 0.2 см³ с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с концентрацией пенициллина-G 0,004 мг/кг. окситетрациклина 0.01 мг/кг. стрептомицина 0,2 мг/кг. хлорамфеникола 0.0003 мг/кг и красителя («Positive Standard»); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя («Negative Standard»)»;

* Дата введения в действие на территории Российской Федерации — 2018—07—01.

1

(Продолжение Изменения № 1 ГОСТ 32219—2013)

дополнить перечислениями:

«- тест-набор Ne 9⁹¹ для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий пластину микропробирок со специфическими рецепторами. меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0.2 см³ с наконечниками (дополнительно);

-тест-набор No Ю^10> для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0.2 см³ с наконечниками (дополнительно)*; сноски к пункту 3.10 изложить в новой редакции;

*_

^Тест-набор «СНАП Бета-Лактам СТ» (IDEXX. США).

²)    Тест-набор «Detvotest BLF» (DSM Food Specialties B.V., Нидерланды).

³)    Тест-набор «Twinsensor⁸¹» (Unisensor. Бельгия).

⁴)    Тест-набор «СНАП Дуо Бета-Тетра СТ» (IDEXX. США).

⁵)    Тест-набор «Beta star Combo» (Neogen Corporation. США).

Тест-набор «Reveal for САР/STREP» (Neogen Corporation. США).

⁷> Тест-набор «4sensor^8TCS» (Unisensor. Бельгия)

⁸) Тест-набор «Betastar 40» (Neogen Corporation. США).

Тест-набор «PROQUI-TEST R 10 ppb» (Proquiga Biotech. SA. Испания).

¹⁰¹ Тест-набор «PROQUI-TEST 4» (Proquiga Biotech. SA. Испания).

Сноски 1)—10) с указанными тест-наборами являются рекомендуемыми к применению».

Раздел 3 дополнить пунктами 3.11—3.16:

«3.11 Буфер для восстановления сухой сыворотки Unisensor Dilution Buffer (Unisensor. Бельгия).

3.12    Раствор гидроксида натрия молярной концентрации с (NaOH) = 1 моль/дм³.

3.13    Анализатор потенциометрический по ГОСТ 19881 2-го класса точности диапазоном измерений от 5,5 до 8.0 ед. pH с погрешностью ± 0,05 ед. pH.

3.14    Криостат, позволяющий поддерживать температуру (4 ♦ 2) °С и (6 ± 2) °С.

3.15    Дозаторы автоматические или механические одноканальные или многоканальные переменной вместимости 0.01 — 0,1 и 0.1 — 1 см³, с допускаемым относительным СКО не более 8.0 %.

3.16    Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752».

Раздел 4 изложить в новой редакции (кроме заголовка):

«Отбор проб продукта — по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 33957 и нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.

Для восстановления сухой сыворотки готовят раствор буфера: при температуре (40 ± 2) °С буфер по 3.11 разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1 (V/V). 1.5 г сухой сыворотки добавляют к 8.5 см³ раствора буфера и измеряют значение pH полученного раствора. Если значение менее 6 ед. pH. то кислотность раствора приводят к значению 6—7 ед. pH при помощи раствора гидроксида натрия по 3.12».

Подпункт 5.2.1.2. Второй абзац. Заменить слово: «молока» на «продукта»;

четвертый абзац после слов «считывают результат» дополнить словами: «способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора».

Подпункт 5.2.1.3. Третий, пятый, шестой абзацы. Заменить слово: «молоке» на «продукте».

Подраздел 5.2 дополнить пунктом 5.2.4:

«5.2.4 Метод с использованием тест-набора N2 9

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.2.4.1 Подготовка к определению

Тест-набор N2 9 по 3.10 хранят о холодильнике при температуре (6 ± 2) °С но более 12 мос с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.

2

(Продолжение Изменения Nv 1 ГОСТ 32219-2013)

5.2.4 2 Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,2 см¹ наполняют анализируемым молоком, выливают в микропробирку и перемешивают с ее содержимым, наполняя и сливая его с помощью пипетки пять раз. до образования розового цвета.

Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 5 — 10 с. затем извлекают и кладут на чистую сухую поверхность. По истечении 5 — 7 мин считывают результат.

5.2.4.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5.1 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.4.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной второй.

Ббльшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует о том. что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке менее предела обнаружения.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствуют о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения*.

Подпункт 5.4.1.2. Второй абзац. Заменить слово: «молока» на «продукта».

четвертый абзац после слов «считывают результат» дополнить словами: «способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора».

Подпункт 5.4.1.3. Третий, четвертый, пятый, шестой абзацы. Заменить слово: «молоке» на «продукте».

Подпункт 5.4.2.2 изложить в новой редакции:

«5.4.2.2 Проведение определения

Пипеткой вносят 0.3 см¹ анализируемого молока во флакон.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5 ± 1) °С в течение 10 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора».

Подраздел 5.4 дополнить пунктом 5.4.3:

«5.4.3 Мотод с использованном тост-набора №10

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, стрептомицина и левомицетина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.4.3.1    Подготовка к определению

Тест-набор № 10 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6 ± 2) °С но более 12 мес с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.

5.4.3.2    Проведение определения

Пипетку вместимостью 0.2 см¹ наполняют анализируемым молоком, выливают в микропробирку, перемешивают с ее содержимым, наполняя и сливая его с помощью пипетки пять раз. до образования розового цвета, и выдерживают в течение 3 мин.

Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 7 — 8 мин, затем извлекают, кладут на чистую сухую поверхность и считывают результат.

5.4.3.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.9 (приложение А).

(Продолжение Изменения № 1 ГОСТ 32219-2013)

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков бета-лактамиого типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков тетраци-клиновой группы — под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной третьей. Зона определения левомицетина — под контрольной зоной четвертой.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует о том. что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке менее предела обнаружения.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствуют о том. что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения».

Раздел 6. Таблицу 1 изложить в новой редакции:

«Таблица 1

Наименьший предел определения антибиотиков с использованием тест наборов, мг/кг

антибиотика № 1 № 2 f* 3 Н» 4 Н» 5 № 6 М» 7 № 8 Не 9 Ч» 10 Алюксициллин 0.0035 0.004 0.003 0.003 0.002 — 0.002 0.002 0.003 0.003 Ампициллин 0.0035 0.004 0.003 0.003 0.002 — 0.003 0.003 0.003 0.003 Бензициллин 0.003 — 0.003 — — — 0.003 — — — Гетациллин 0.01 — 0.005 — — — 0.005 — — — Дигидрострептомицин — — — — — — 0.05 — — 0.1 Диклоксациллин 0,02 0.03 0.006 0,011 0.002 — 0.006 0.003 0.006 0.003 Доксициклин — — 0.0025 — 0.002 — 0.002 0.002 0.006 0.006 Клоксациллин 0.022 0.03 0.006 0.018 0.002 — 0.006 0.003 0.003 0.003 Левомицетин (хлорамфенихол) _ — — — — 0.0003 0.0003 0.0003 — 0.0003 Нафциллин 0.052 — 0.03 0.046 0.0075 — 0.03 0.01 0.01 0.01 Охсациллин 0.024 0.03 0.012 0.032 0.003 — 0.012 0.003 0.003 0.003 Охситетрациклин — — 0.0075 0.01 0.01 — 0.007 0.01 0.01 0.01 Пенициллин G 0.002 0.004 0.003 0.001 0.002 — 0.003 0.003 0.002 0.0015 Пенициллин V 0.003 — 0.003 — — — 0.003 — — — Пилерацилпин 0.006 — 0.005 — — — 0.005 — — — Прокаин-пенициллин 0.002 — 0.003 — — — 0.003 — — — Стрептомицин — — — — — 0.2 0.15 0.2 — 0.1 Тетрациклин — — 0.01 0.01 0.01 — 0.01 0.01 0.008 0.008 Тикарциллин 0.04 Хлортетрациклин — — 0.006 0.026 0.006 — 0.005 0.006 0.004 0.004 Цефадроксил 0,03 Цефаэолин 0.013 0.05 — — 0.015 — — 0.02 0.005 — Цефалексин 0.025 0.1 — 0.01 0.4 — — — — —

(Продолжение Изменения № 1 ГОСТ 32219-2013)

Окончание таблицы 1 Наименьший предел определения змтибиотимэв с использованием тест-наборов. мг/м

амтибиотиха № 1 Н» 2 № 3 Nr 4 № 5 N* 6 на 7 № 8 № В № 10 Цефалоний 0.04 — 0.003 — — — 0.003 — — — Цефалониум 0.04 0.02 0.003 0.04 0.003 — 0.003 0.003 0.004 0.004 Цефапирин 0.011 — — 0.008 0.004 — — 0.004 0.004 0.004 Цефацетрил 0.05 — — 0.009 — — — — — — Цефкином 0.02 0.02 — 0.01 0.006 — — 0.006 0.005 0.005 Цефоксаэол 0.05 Цефоперазон 0,01 0.05 0.003 0.004 0.003 — 0.003 0.004 0.005 0.004 Цефотаксим 0.01 Цефрадин 0.03 — Цефтиофур 0.011 0.1 — 0.002 0.05 — 0.01 0.015 0.01 0.01 Цефуроксим 0.01

Стандарт дополнить разделами 7 и 8:

«7 Требования, обеспечивающие безопасность

При выполнении работ необходимо, чтобы помещение лаборатории было оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с требованиями ГОСТ 12.4.021 и содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не превышало норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

Требования техники безопасности при работе с химическими реактивами — в соответствии с ГОСТ 12.1.007; требования техники безопасности при работе с электроустановками — в соответствии с ГОСТ 12.1.019.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и должно быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.

8 Требования к оператору

К проведению определения наличия антибиотиков допускаются лица, имеющие специальное образование по профилю выполняемых работ, прошедшие обучение приемам работы с оборудованием, освоившие выполнение предусмотренных методикой операций, ранее не принимавшие антибактериальные и противовирусные препараты в течение периода их полного выведения из организма в соответствии с инструкцией к конкретному препарату».

Приложение А дополнить пунктами А.5.1 и А.9:

«А.5.1 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-нзбора № 9 приведены на рисунке А5.1.

5

(Продолжение Изменения № 1 ГОСТ 32219-2013)

Контрольная зона

Зона определения антибиотиков тетра цикл кмовой группы

Зона определения антибиотиков бета-пактамного типа

Рисунок А.5.1»;

А.9 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора № 10 приведены на рисунке А.9.

Контрольная зона

Зона определения: антибиотиков бета-пактамнога типа антибиотиков теграциклиновой группы

стрептомицина

левомицотима

Рисунок А.9».

(ИУС No 3 2018 г.)

6

1