СОВЕТ ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ВЗАИМОПОМОЩИ

СТАНДАРТ СЭВ СТ СЭВ 4251-83

ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 26 апреля 1984 г. № 1440 стандарт Совета Экономической Взаимопомощи СТ СЭВ 4251—83 «Пищевые продукты. Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов» введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта СССР

в договорно-правовых отношениях по сотрудничеству

с 01.07.85

СТАНДАРТ СЭВ

ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов

Группа Н09

1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в селективную агаризованную среду, культивировании посевов при (24 ±1) °С в течение 5 d, подсчете всех видимых колоний дрожжей и плесневых грибов, типичных по макро-н (или) микроскопической морфологии.

2. ПРОБЫ

2.1.    Пробы отбирают и подготавливают к анализу по СТ СЭВ 3013-81 и СТ СЭВ 3014-81.

2.2.    Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления разведения, должна составлять не менее (10±1) g (cm³), а предназначенной для непосредственного высева в питательные среды— не менее 1 g (cm³).

3. АППАРАТУРА

Для проведения анализа применяют аппаратуру по СТ СЭВ 3014—81 со следующим дополнением:

1)    микроскоп;

2)    термостатна (24± 1) °С;

3)    чашки бактериологические с внутренним диаметром (90±2) или (100±2) mm;

4)    пипетки вместимостью 1 и 10 cm³;

5)    стекла предметные;

6)    петли бактериологические;

7)    фильтры мембранные со средним диаметром пор 0,5—

0,8 pm;

8)    палочки стеклянные с загнутым концом.

Утвержден Постоянной Комиссией по сотрудничеству в области стандартизации Дрезден, декабрь 1983 г.

4. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

4.1. Для проведения анализа применяют:

1)    дрожжевой экстракт в порошке сухой;

2)    глюкозу;

3)    агар;

4)    сусло солодовое неохмеленное или виноградное, с массовой долей сухих веществ 7—8%;

5)    кислоту лимонную, 20%-ный водный раствор;

6)    бенгальскую красную, 0,15%-ный раствор; готовят следующим образом: 0,15 g бенгальской красной растворяют в 100 cm³ дистиллированной воды и стерилизуют в течение 15 min при температуре (121 ± 1) °С. Стерильный раствор хранят в герметически закрытом сосуде не более двух недель при температуре (4±1) °С;

7) . основу для агаризованных питательных сред с антибиотиками; готовят следующим образом: 5g дрожжевого экстракта, 20 g глюкозы, 20 g агара добавляют к 1000 cm³ дистиллированной воды. Смесь подогревают, периодически помешивая, до расплавления составных частей, охлаждают до 45—55 °С, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,5±0,1, стерилизуют в течение 15 min при (121 ±1) °С. Основу среды хранят при температуре (4±1) °С не более 14 d;

8)    среду агарнзованную с хлортетрациклином и хлорамфенн-колом; готовят следующим образом: к 950 cm³ расплавленной и охлажденной до 45—47 °С основы добавляют по 25 cm³ свежеприготовленных и стерилизованных путем мембранной фильтрации растворов хлорамфеникола и хлортетрациклина;

9)    среду агарнзованную с окситетрациклином; готовят следующим образом: к 900 cm³ расплавленной и охлажденной до 45—47°С основы добавляют 100 cm³ свежеприготовленного и стерилизованного путем мембранной фильтрации раствора окситетрациклина;

10)    среду агаризованную с хлорамфениколом; готовят следующим образом: к 975 cm³ расплавленной и охлажденной до 45— 47°С основы добавляют 25 cm³ свежеприготовленного и стерилизованного путем мембранной фильтрации раствора хлорамфеникола (допускается хлорамфеникол стерилизовать вместе с основой в течение 15 min при (121±1) °С);

11)    среду агаризованную с окситетрациклином и гентамицином, готовят следующим образом: перед применением к 1000 cm³ расплавленной и охлажденной до 45—47 °С основы добавляют 100 cm³ раствора окситетрациклина и 10 cm³ раствора гентамицина свежеприготовленных и стерилизованных путем мембранной фильтрации.

Среды с антибиотиками хранению не подлежат. В случае необходимости для ингибирования развития воздушного мицелия •плесневых грибов, «к среде с антибиотиками дебавляют раствор

красной бенгальской так, чтобы ее окончательная концентрация была 150 rng на 1000 cm³ готовой среды;

12)    солодовое неохмеленное сусло; готовят следующим образом: к 1000 cm³ водопроводной воды, подогретой до (50±1)°С, прибавляют 200 g молотого ячменного солода. Смесь тщательно перемешивают в течение 30 min, подогревают на водяной бане со скоростью 1 °С в min до (55±1)°С, выдерживают паузу 15 min, затем вновь с той же скоростью поднимают температуру до 63— 65 °С и удерживают ее на этом уровне в течение 1 h. Температуру поднимают со скоростью 1°С в 1 min до (72=Ы)°С и выдерживают сусло при этой температуре до полного осахаривания. Степень осахаривания сусла проверяют раствором Люголя. Для этого каплю сусла переносят в фарфоровую чашку и осторожно прибавляют к нему каплю раствора Люголя. Окончательно осаха-ренное сусло не должно менять окраску в присутствии индикатора. Полученное сусло фильтруют через полотно или фильтровальную бумагу, доливают до 1000 cm³ и стерилизуют 30 min в автоклаве при 107—110°С. Затем сусло декантируют. Прозрачное сусло разбавляют водой до получения раствора с массовой долей сухих веществ 7—8%, разливают в стерильную посуду, стерилизуют в течение 20 min при (116±1)°С. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, доводя массовую долю сухих веществ в растворе до 7—8%;

13)    сусло солодовое агаризованное; готовят следующим образом: к 1000 cm³ солодового неохмеленпого или виноградного сусла с массовой долей сухих веществ 7—8% прибавляют 20 g агара. Среду нагревают на водяной бане до полного расплавления агара и фильтруют через гигроскопическую вату или фильтровальную бумагу. Фильтрат разливают в стерильные колбы или пробирки и стерилизуют в течение 15—20 min при (116+1) °С. Охлаждают до (45—55) °С и устанавливают pH 3,6±0,1, добавляя 2—3 cm² стерильного 20%-иого раствора лимонной кислоты. Готовую среду хранят в холодильнике при температуре (4+1) °С не более 7с1;

14)    гентамицин, 0,5%-ный водный раствор;

15)    окситетрациклии, основание или гидрохлорид, 0,1%-ный водный раствор;

16)    хлортетрациклии, гидрохлорид, 0,4%-ный водный раствор;

17)    хлорамфеникол (леиомецитин), 0,4%-ный водный раствор.

4.2.    Для приготовления растворов антибиотиков, перечисленных в позициях 14, 15, 16, 17, используют дистиллированную или бидистиллированную воду с pH от 6,8 до 7,0.

4.3.    Перед применением растворы антибиотиков, перечисленных в позициях 14, 15, 16, 17, стерилизуют методом мембранной фильтрации.

Стерильные растворы антибиотиков для инъекций допускается использовать без предварительной мембранной фильтрации.

5. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

5.1.    Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое количество дрожжей и плесневых грибов в 1 g (cm³) исследуемого продукта.

5.2.    Высевают по 1 cm³ продукта и (или) его соответствующих разведений параллельно в две стерильные чашки Петри. В каждую чашку Петри, содержащую инокулум, добавляют не позднее чем через 15 пип (14+1) cm³ агаризованиой среды, охлажденной до (45±1)°С. Среду немедленно тщательно перемешивают и оставляют для застывания.

5.3.    Для ориентировочных исследований пищевых продуктов допускается посев на поверхность плотных питательных сред по СТ СЭВ 3015—81, п. 2.4.

5.4.    Для пищевых продуктов, в которых предполагают содержание небольшого количества дрожжей, допускается использовать метод мембранной фильтрации по СТ СЭВ 3015—81, п. 2.6.

5.5.    При разногласии в оценке качества продукта используют агаризованную среду с хлорамфениколом и (или) хлорамфенико-ло«у| и хлортетрациклином. Инокуляция проводится глубинным методом по п. 5.2.

5.6.    После застывания Сред посевы инкубируют крышкой вверх при (24+1) °С в течение 5 d. Через 3 d инкубирования проводят предварительный учет типичных колоний, а через 5 d — оконча-тельный, наблюдая за ростом дрожжей и плесневых грибов визуально, а при необходимости и микроскопически (методом нативной микроскопии).

6. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

6.1.    Результат оценивают по каждой пробе отдельно.

6.2.    Для подсчета отбирают чашки с посевами, где выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.

6.3.    Результаты обрабатывают, пересчитывают и записывают в соответствии с СТ СЭВ 3015—81 отдельно для дрожжей и плесневых грибов.

Колец

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    Автор—Делегация НРБ и ЧССР в Постоянной Комиссии по сотрудничеству в области тццевой промышленности.

2.    Темы 20.010.09—81 и 20.010.10—61.

3.    Стандарт СЭВ утвержден на 54-м заседании ПКС.

4.    Сроки начала -применения стандарта СЭВ:

Сдано в наб. 29.01.86 Подп. и печ. 25.03.85 0.5 уел. пЛл. 0.5 уел. кр.*отт. 0.32 уч.-пэд. л. Ткр. 4000    Цена    3    хоп

Ордена «Знак Почета* Издательство стандартов. 123840, Москва. ГСП. НовопресненскиП пер., 3 Тип. «Московский печатник*. Мосхва. Лялин пер., б. Зак. 168